VAHTS Dual UMI UDI Adapters Set 1 – Set 4 for Illumina
低频突变检测利器
Illumina 平台DNA文库构建
· 检测低至0.1%低频突变:助力低频突变检测,配合深度测序,有效挖掘低频突变信息
· 降低标签跳跃和错配:双端唯一配对UDI,降低标签错配
1. 检测低至0.1%低频突变:
以肿瘤SNV 0.1% ctDNA标准品(含11个已知的突变位点)为模板,使用N351-N354和I*公司同类产品进行建库,捕获后上机测序,下机数据质量与I*公司同类产品相当。使用GATK4和Vardict两款软件进行低频突变分析,对0.1%低频突变的检出优于I*公司同类产品。
图1. 下机数据质量及0.1%低频突变检出
2. 基于测序的交叉污染质控
N351-N354接头在出厂时均进行了基于测序的严格质控,避免交叉污染。使用单一片段建库后进行测序,UDI标签与单一片段连接的正确率可以达到99.99%,相对于单端接头标签错配率大大降低。
单端接头
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N351-N352
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N353-N354
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图2. 基于测序的交叉污染质控
VAHTS Dual UMI UDI Adapters Set 1 - Set 4 for Illumina是适配于Illumina高通量测序平台的DNA文库构建试剂盒。试剂盒中VAHTS Dual UMI Adapters for Illumina为不完整的双端UMI-Y型接头,可兼容多种A-T连接的文库构建试剂盒。在接头连接后,Insert DNA两端分别添加上5 - 6 nt的Unique Molecular Identifier(UMI),可用于检测低频突变。此外,试剂盒中的VAHTS UDI Primer for Illumina包含特异性搭配的Unique Dual Index(UDI),经文库扩增后,可实现两个完全独立Index双重检验,较大限度降低标签跳跃和错配(Index hopping & Index misassignment),从而保证进入分析流程的reads接近样品的真实情况。
本套试剂盒由Set 1 - Set 4组成,每个Set中均包含24种不同VAHTS UDI Primer for Illumina以及 VAHTS Dual UMI Adapters for Illumina。
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组分 |
N351(96 rxns) |
N352(96 rxns) |
N353(96 rxns) |
N354(96 rxns) |
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VAHTS UDI Primer for Illumina(UDI 001 - UDI 024)
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20 μl/each |
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VAHTS UDI Primer for Illumina(UDI 025 - UDI 048)
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20 μl/each |
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VAHTS UDI Primer for Illumina(UDI 049 - UDI 072)
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20 μl/each |
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VAHTS UDI Primer for Illumina(UDI 073 - UDI 096)
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20 μl/each |
VAHTS Dual UMI Adaptersfor Illumina
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480 μl |
480 μl |
480 μl |
480 μl |
单个DNA文库DNA Adapter使用量依据起始模板投入量而定,具体使用浓度可参考附录。
-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输
Q1:N351-N354与普通双端接头(N321-N322)有什么区别?
A1:N351-N354是双端UDI、UMI接头。双端UMI可以降低假阳性背景,有效提高低频突变检出效率。双端UDI为特异组合的i5和i7,每一个i5和i7都是互不相同且一一对应的,可实现两个完全独立Index双重检验,最大限度降低标签跳跃和错配。N351-N354无需自行搭配i5和i7,操作更简便。
Q2:使用N351-N354建库后文库结构?
A2:
相较于普通双端接头的文库分子,使用N351-N354的文库分子会含有12-14 bp的双端UMI序列,会占用一定的数据量,推荐在上机时根据实际需求相应的增加10%的数据量。
Q3:建库中推荐使用接头的稀释倍数和体积:
A3:
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